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人表皮生长因子(EGF)定量检测试剂盒(ELISA)

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  • 更新日期:2011-04-19 11:31
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详细介绍

使用说明书
                                                                                                                            
【试剂盒名称】
人表皮生长因子(EGF)定量检测试剂盒(ELISA)
【试剂盒用途】
定量检测人血清、血浆及相关液体样本中表皮生长因子(EGF)的含量。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人表皮生长因子EGF)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人表皮生长因子(EGF)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人表皮生长因子(EGF)含量。
【试剂盒组成】
1
酶标包被板
12孔×8条
7
显色剂A液
6mL
2
标准品:800pg/mL
0.6mL
8
显色剂B液
6mL
3
20倍浓缩洗涤液
25mL
9
终止液
6mL
4
标准品稀释液
6mL
10
说明书
1份
5
样本稀释液
6mL
11
封板膜
2张
6
酶标试剂
6mL
12
密封袋
1个
备注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:800、400、200、100、50、25pg/mL
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
7、温育:重复4的操作。
8、洗板:重复5的操作。
9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【样本要求】
1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。
【注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为25-800pg/mL,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用标准品稀释液稀释后测定准确结果(25-800pg/mL范围内),乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
6、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。
9、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
 
【操作程序总结】
 
准备试剂,样品和标准品
 

加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟
 
洗板4次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟
 
洗板4次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟
 
加入终止液
 
15分钟之内读OD值
 
计算
 
【检测范围】
25-800pg/mL
【规格】
96人份/盒
【贮藏】
2-8℃,避光防潮保存。
【有效期】
6个月

chzbio.biogo.net/
 
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