海基蛋白表达试剂盒包括原核表达试剂盒和杆状病毒表达试剂盒,该系列试剂盒配有优化的表达载体和高效的Tag切割酶,从而保证了蛋白的高效表达和tag的有效切除。试剂盒所采用的表达载体增加了TEV蛋白酶(31 KDa)切位点,便于高效率、高特异性的去除融合Tag。该系列蛋白表达试剂盒配备了rTEV蛋白酶, 它与EK、Thrombin、Factor Xa、SUMO等蛋白酶相比,具有高活性、高特异性的双重特点,rTEV蛋白酶因具有高剪切活性和特异性,已成为融合蛋白表达后去除融合tag的首选蛋白酶。本rTEV蛋白酶包含6×His tag,在酶切消化完毕后可同tag和未完全酶切的融合蛋白一起通过结合Ni-NTA而去除,去除掉tag的目的蛋白因不与Ni-NTA纯化柱(Cat.No.: C0401, HaiGene)结合而流出,从而得到高纯度不含融合tag的目的蛋白。pET32-TEV载体保留了Trx标签(分子量约17 KDa),该标签可有效的提高蛋白表达的可溶性,从而简化后续的纯化步骤、提高活性蛋白的表达量。

该系列蛋白表达试剂盒都配有Positive Expression Control Plasmid,原核表达试剂盒中在pET32-TEV载体中插入525 bp基因(Kpn I/XhoI),蛋白融合表达后分子量约37 KDa,该融合蛋白在rTEV酶切后,目标蛋白分子量约20 KDa,Trx.tag约17 KDa。杆状病毒表达试剂盒中在pFastBac HTb载体中插入一354 bp基因(Xba I/Hind III),蛋白融合表达后分子量约19 KDa,该融合蛋白在rTEV酶切后,目标蛋白分子量约16 KDa,His.tag约3 KDa。

rTEV蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶,可特异性识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七氨基酸序列,并高特异性、高活性剪切(剪切位点在Gln-Gly之间)。rTEV蛋白酶在4℃-30℃温度、pH范围(6.0-8.5)反应条件下均具有活性。