QQ:859207209
标王 热搜: 技术  生物  TNF  FGF  色谱  MIP  试剂  仪器设备  离心机  仪器 
 
收藏 | 举报 2010-08-10 10:28   关注:1348   回答:2

有关荧光差异显示的问题

已关闭 悬赏分:0
做小细胞肺癌的mRNA的荧光差异显示,用的是genomyxSC系统,锚定引物1-12,随机引物1-4,按照试剂盒的说明进行RT-PCR,但一直没有扩增出条带,不知是mRNA的问题还是实验操作的问题
举报 2010-08-11 08:41
1、你在操作过程中会不会给体系带入RNA酶,造成RNA降解。这种情况在操作过程中,你需要注意RNA酶对体系造成的影响。 2、扩增片段是不是太长,造成扩增相对较难成功。这种情况下,你可以调整扩增条件,多做几次。必要时可以分步做,先做RT,再用RT产物做PCR。 3、试剂盒是否过关,如果条件允许,你不妨试试国外大公司的产品。
举报 2010-08-12 08:55
提取组织总RNA是差异显示的第一步,其质量的好坏对整个实验非常关键。没有质量合格的RNA,之后的RT-PCR和凝胶显像也即失去了物质基础。 提取过程中比较难以控制的是RNA酶的污染,RNA酶广泛存在与自然界,且不能轻易被灭活。我曾经同时提取不同组织,包括肝脏、心、肾脏和骨组织的RNA,采用Progema公司的Trizol试剂和国产的RNA提取试剂盒提取RNA都很好用。不知道你是做的细胞的还是组织的,除了常规提取中各种实验器材和试剂的灭酶外,尤其注意绝对保证及时取材新鲜组织,液氮速冻和Trizol中匀浆迅速连贯操作以及氯仿抽提后各步外界污染的严格控制。 提取的RNA电泳可以看到清晰的3条带才可以继续做下一步实验。 另外最好使用无RNase的DNase处理一下,以防有DNA污染而出现假阳性
0条 [查看全部]  相关评论
 
网站首页 | 广告图文 | 付款方式 | 关于我们 | 版权隐私 | 联系方式 | 诚聘英才 | 网站地图 | 排名推广 | 广告服务 | 积分换礼 | 网站留言 | RSS订阅 | 京ICP备05052705号
Powered by DESTOON