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收藏 | 举报 2019-04-03 16:08   关注:50   回答:0

实验新手在EMSA实验中需要注意什么?

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凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

EMSA,知其所以然! 

正如上方实验示意图所示, 蛋白质可以与核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。通过竞争性对照组,可以验证实验的特异性。 

EMSA,难点与痛点

EMSA实验是很多实验新手的拦路虎,不仅实验步骤繁琐(凝胶电泳,转膜,紫外交联,信号检测),而且实验与对照组较多(通常为5组,标记探针标记探针+蛋白标记探针+蛋白+未标记探针(特异竞争寡核苷酸)标记探针+蛋白+未标记突变探针标记探针+蛋白+抗体),经过多次测试优化才能获得理想的实验结果,综合成本非常高。 

突破EMSA,创新的新方法,Nature为您测试: 

作为表观遗传学的专业解决方案供应商,艾美捷科技为您推荐,Epigentek品牌创新推出的通用蛋白-DNA结合分析试剂盒(比色法)

产品名称及描述

品牌

货号

产品说明

EpiQuik General Protein-DNA Binding Assay Kit
通用蛋白-DNA结合分析试剂盒(比色法)

Epigentek

P-2004

详情

* 客户需自行准备如下材料:[1]生物素标记的特异性探针; [2]未标记的特异性探针;[3]目标蛋白的一抗与HRP-二抗

通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒原理: 

通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒(比色),用于测量核提取物中转录因子与DNA结合活性。在实验中,含有靶向转录因子的DNA结合共有序列的生物素标记的双链寡核苷酸(寡核苷酸)与结合试验缓冲液中的核提取物一起温育。核提取物中活性形式的转录因子与其共有序列结合。然后将寡蛋白复合物捕获到测定微孔上。靶蛋白可以通过高亲和力抗体识别,并通过检测抗体 - 显色试剂反应系统进行比色测量。 

产品特点与优势: 

1. 最快的程序:完整的检测可在3小时内完成。

2. 可拆卸微孔板,使测定灵活:手动或高通量分析。

3. 比色法分析,无放射性材料,更安全。

4. 简单,可靠,一致的检测条件。 

Nature文章发表结果: 

《Klengel, Torsten, et al. "Allele-specific FKBP5 DNA demethylation mediates gene–childhood trauma interactions." Nature neuroscience 16.1 (2013): 33.》

rs1360780基因的A/G等位基因与TBP的结合能力分析,A等位基因的亲和力明显高于G. 

更多发表文章,欢迎了解:

Hekmat-Scafe DS et. al. (November 2016). Using yeast to determine the functional consequences of mutations in the human p53 tumor suppressor gene: An introductory course-based undergraduate research experience in molecular and cell biology.Biochem Mol Biol Educ.

Jang JY et. al. (February 2016). Targeting adenine nucleotide translocase-2 (ANT2) to overcome resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor in non-small cell lung cancer. Mol Cancer Ther. 

Koh J et. al. (October 2015). EML4-ALK enhances programmed cell death-ligand 1 expression in pulmonary adenocarcinoma via hypoxia-inducible factor (HIF)-1α and STAT3 OncoImmunology. 

Gao Y The Univer et. al. (June 2014). Up-regulation of Hepatic VLDLR via PPARα Is Required for the Triglyceride-Lowering Effect of Fenofibrate. J Lipid Res. 

* 通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒说明书点击下载 

Epigentek作为表观遗传学的专业解决方案供应商,在全球范围具有卓越的影响力,其推出的产品能够有效帮助研究者快速获得理想结果,不仅性价比绝佳,而且被大量文献引用,让您绝无后顾之忧! 

Epigentek集团公司是超创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商。公司开发了包括400多个砖利产品的全面的产品组合,为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。作为Epigentek集团中国区域的总代理,艾美捷将其引入中国,作为其中国区域代理,将为客户提供完整的表观遗传解决方案,产品包括表观遗传研究用分析试剂盒、抗体以及相关的抑制剂/拮抗剂等产品。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或区域代理,艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。

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