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单克隆抗体的制备

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产品详细信息

公司的专家具有十多年的单克隆抗体生产和鉴定的经验，能为您提供多方位的，灵活的、适合您的抗体定制服务。
根据客户特殊的抗原制备杂交瘤细胞系，包括以下过程：

第一阶段：免疫

客户提供抗原，根据标准的免疫方案进行免疫，监测小鼠的免疫反应。初次抗原免疫，动物分别于间隔 3-4 周进行加强免疫。第三次加强免疫 2 周后，采集血清并进行抗体效价测定。继续加强免疫直至血清效价达到要求。选择效价最高的动物进行最后一次免疫，即融合前加强免疫。

第二阶段：融合及分析

脾细胞与骨髓瘤细胞融合，制定筛选计划以获得产生抗体的最佳杂交瘤细胞。选择效价最高的动物，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合。融合后 10 ～ 12 天检测杂交瘤细胞培养上清，筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞，并对阳性的克隆进行克隆化，经多次克隆化保证细胞为单克隆，且连续两次克隆化所检测亚克隆的阳性率为 100% 。扩大培养抗体阳性的亚克隆，并送客户评价。选择最终的克隆扩大培养并冻存，测定 Ig 的亚型。可以为客户提供冻存的细胞或培养的细胞。
按阶段分步的标准单克隆抗体服务流程：
阶段一通过规范化免疫接种程序免疫 5 只 BALB/c 小鼠。用 ELISA 测定血清滴度。
您需提供符合技术要求数量足够的抗原 ,3-4mg 蛋白免疫原 ( 要求纯度 SDS-PAGE 大于 90%), 或两种不同交联 ( 如交联 BSA 或 KLH 等 ) 的多肽各 2-3mg( 要求纯度大于 90%), 分别作为免疫原和筛选抗体用。
公司提供载体与多肽的交联服务。
阶段二当血清中抗体滴度达到融合要求后，取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，用 ELISA 方法检测杂交瘤细胞培养的上清液。筛选出抗体阳性的杂交瘤细胞克隆，阳性克隆培养上清液将会送交给客户实验室作进一步鉴定。
阶段三根据客户需要，阳性克隆通过有限稀释进行多次克隆化，并测定抗体 Ig 的亚型。选择 3-5 个克隆生产腹水。

结果交付：为客户提供 3 ～ 5 个克隆杂交瘤细胞株，每个克隆提供 10ml 的腹水。
需时： 6 ～ 8 个月
项目价格
单克隆抗体的制备（全程服务） 45000 元
注 : 抗体的制备各阶段的 ELISA 检测为免费
相关服务
Western Blotting （ WB ）实验 100 元
腹水生产 1000 元每 20 毫升腹水
抗体纯化 1700 元每 10 毫升腹水 ( 硫酸铵沉淀法 )
2500 元每 10 毫升腹水 (ProteinA 或 ProteinG 亲合层析法 )
兔多克隆抗体的制备
这项服务包括免疫 2 只雌性新西兰白兔用于生产抗血清，并进一步提供抗血清纯化服务，包括免费的 ELISA 测定抗血清效价。
1. 免疫原由客户提供，如为蛋白抗原，要求其纯度 SDS-PAGE 大于 85% ；如使用多肽抗原，整个过程共需 5 ～ 6mg 交联的多肽抗原， 3.5mg 抗原用于免疫 2 只新西兰白兔，另 1 ～ 2mg 抗原用于 ELISA 效价测定。

2. 兔的全程免疫。

2 只新西兰白兔，采用以下标准的免疫程序：
操作天数备注
免疫 0 首次免疫 50 ～ 250mg/ 只，与弗氏完全佐剂混合
21 再次免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合，皮下多点
42 加强免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合，皮下多点
70 加强免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合，皮下多点
采血 0 采集对照血清， 5ml
77 采集血清 2ml 测效价
78 第一次采血， 15 ～ 20ml 血清
85 第二次采血， 40ml 血清
4. 血清抗体 ELISA 效价检测，不另收费。

5. 血清的纯化， ProteinG 方法 (90%) 。
交付时间：免疫程序结束后 1 周。
结果交付：为客户提供 ELISA 效价大于 1:5000 ，总量 80 ～ 100ml 免疫血清，实验记录及相应的鉴定报告。

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