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质粒DNA制备服务

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质粒DNA的用途

质粒DNA作为分子克隆和基因表达的载体，在分子生物学领域已经得到了非常广泛的应用。随着基因治疗研究的不断发展，DNA疫苗应运而生，人们对质粒DNA又有了新的要求和需要。用于基因治疗的质粒DNA，是将治疗基因至于含有真核表达元件的质粒载体中，而构建成的重组质粒。目前，应用质粒DNA进行的基因治疗几乎涵盖了所有的疾病种类，主要有遗传性疾病，如囊肿性纤维化（CF），肿瘤的基因治疗，基因疫苗，如乙肝DNA疫苗、HIV DNA疫苗等。作为药物使用的质粒DNA，使用量大，通常个人剂量达到毫克量级，一般都采用发酵的方法制备；又因其应用于临床，质粒DNA的纯度、内毒素等指标的要求更加严格。

因此，对于实验室和临床应用来说，获得高纯度、低内毒素的质粒DNA都是十分有意义的。

需要您协助的：

1. 与我们讨论实验的方案，提出你对纯度的要求，签定委托合同。

2. 您可以提供含有目的质粒菌株，或构建好的质粒（我们为您转化到合适的大肠杆菌中），也可以提供发酵后收集的菌体。

3. 提供提供必要的资料，包括酶切位点，质粒大小，以供鉴定时使用。

我们提供的服务

1. 对受体菌进行发酵工艺的研究，一般情况下发酵的产量约为10毫克质粒DNA/升，通过发酵条件的优化可以达到产量为30-60毫克质粒DNA/升。如果用合成培养基，产量可以达到60-150毫克质粒DNA/升，但是生产的成本很高。

2. 对质粒DNA进行纯化工艺的研究，我们有比较丰富的质粒DNA纯化的经验，可以根据您的具体要求设计纯化方案。为您提供可以放大的纯化工艺。

3. 如果您仅需要获得毫克级的纯品质粒DNA（纯度大于90%），而对发酵工艺和纯化工艺不作要求。我们可以为您提供质粒DNA的制备服务。

可能遇到的问题及解决策略：

1. 带有缺刻的质粒DNA从cccDNA中完全去除比较困难，一般情况下缺刻的质粒DNA在纯品含有大约5%左右。(每毫克质粒DNA中残余蛋白小于1ug，genomic DNA 小于2 ug，RNA小于0.1 ug，内毒素小于10 E.U.)

2. 菌体中质粒DNA的定量，我们采用质量稳定的质粒DNA抽提试剂盒抽提质粒DNA，在琼脂糖凝胶电泳没有RNA污染，用紫外分光光度法定量。这样的定量方法并不能反映菌体中质粒DNA含量，但是对于我们的发酵工艺来说具有指导意义。

特别说明：
研究的项目具有很多的不确定因数，如果实验的结果没有达到预期的结果，我们将收取部分费用。

注：所有应用领域中提到的内容，我们都可进行，具体业务欢迎垂询 021-50801873，或E-MAIL fdyd@fudanyueda.com 我们将竭诚为您服务。
　

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