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反义RNA的设计及其载体制备
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技术简介:
虽然RNA干扰技术显示了其强大的优越性,但反义技术仍然具有其优势。如果您的实验需要制备反义RNA特别是需要大量的反义RNA时,请联系我们,我们也为您构建反义RNA表达质粒。
EGS(External Guide Sequence,EGS)是介于核酶和反义技术之间的一项RNA技术。EGS构建没有核酶那么复杂,效果好于反义RNA。EGS指导RNaseP切割底物的过程中,包含有部分反义技术,因为EGS必须在某一段与底物互补形成双链。但通常在M1GSRNA切割TKmRNA时,由反义作用引起的效果不超过15%。EGS指导RNaseP切割底物与反义核酸比较的优势在于:1.RNaseP的作用是在已存在的反义效能基础上的加强;2.RNaseP在切割作用完成后,从复合物上释放出来,可再次利用;3.因为RNaseP很快形成对细胞内核酸酶稳定的高级结构复合物,RNaseP 与EGS在细胞内比单链的反义RNA稳定;4.EGS与靶RNA的比例比反义RNA与靶RNA的比例低得多。 EGS指导RNaseP切割底物与核酶比较的优势在于:核酶需要一定的结构,如锤头状序列,发夹样结构,内含子I和II等,而目前设计与合成特异EGS片段的方法仅需几小时或几天,Altman建立了一种被称为“指导性演化”的方法,可迅速选择出能与底物mRNA紧密结合,提高RNaseP切割效率的RNA,称为EGS。

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