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蛋白质的真核表达及纯化

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蛋白质真核表达的用途：
将克隆化基因导入毕赤酵母细胞用于表达大量蛋白质的方法在蛋白质纯化、功能分析及临床应用方面都是很有价值的。用该系统成功表达的外源基因有三十多种，其中大部分为医药制品，如人白介素－2、人血清白蛋白、肿瘤坏死因子、乙肝表面抗原、人巨细胞病毒抗原、抗凝血银子水蛭素衍生物等，有些即将进入市场。也可在毕赤酵母细胞中生产完整的天然蛋白质分子，以研究其功能。

需要您协助的：
1. 与我们讨论实验的方案，提供必要的资料，签定委托合同。
2. 您可以提供已克隆在原核表达/克隆载体上的质粒或菌株。
3. 也可将已经通过测序验证的目的PCR产物或模板交给我们，由我们为您克隆在相应的真核载体上。
4. 如果有经过验证的抗体可用于Western验证表达的蛋白，请提供。

我们提供的服务
1. 目的基因的克隆：我们有多种真核表达载体供您选择，完全能满足不同的实验要求。我们会提供克隆好的质粒、菌株及测序报告，时间为5～7周。
2. 蛋白质的真核表达及纯化：我们将这一过程分为前期发酵条件的初步实验，纯化工艺的确定，后期的蛋白质的大量制备以及及蛋白质鉴定三个部分，时间为3～6个月，最终我们提供给您⑴初步的发酵条件；⑵比较合理的、可以放大的纯化工艺；⑶纯化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白电泳结果和详细的实验记录；
3. 交付的蛋白将通过Western检验以确定表达的蛋白的正确性，Western所用的抗体由客户提供。

可能遇到的问题及解决策略：
&#61548；没有目的蛋白表达；目的基因并非在所有的真核表达载体中都能顺利表达，或者目的基因不能分泌表达，由于结构或其他原因造成无表达或表达量过低，可通过更换表达载体的方式解决，这种解决方法远比优化表达条件来的迅速。

&#61548；不可溶性蛋白质的纯化：在蛋白质纯化过程中，菌体经破碎后，蛋白质仍可能存在于包涵体中，而不是在上清中，经过变性后纯化的蛋白要研究其复性的条件。

&#61548； Western检测没有信号；有蛋白表达却无法用Western检测出，最有可能的原因是克隆时目的基因的阅读框产生变化，或客户提供的抗体不合适。

服务费用：
基因表达的费用依据您委托我们的不同实验要求而定，如是否要求我们为您克隆基因，表达基因的长短等。
我们拥有Biostat C10-3 Fermentor 10升（工作容积，总体积15升）全自动在位灭菌发酵罐，安玛西亚公司的AKTA Explorere 100 层析系统和比较齐全的层析介质。

特别说明：
&#61548； □由客户提供的表达克隆但无法表达，确定是克隆问题的，我们将收取部分费用。
&#61548； □我们提供给客户的除表达的蛋白外，还包括克隆菌种，以供客户使用，或由我们保存，将来按客户需要再进行表达提取，费用另计。
&#61548； □由于目前我们所用的表达系统对于2kb以内的基因有较高的保证，所有常规业务限于2kb的基因，大于2kb的基因价格另议。
&#61548； □对于所表达的蛋白，本公司仅仅按照所提供的序列来设计实验，对于该序列是否一定具有所期望的生物活性，我们不承担任何责任。

注：所有应用领域中提到的内容，我们都可进行，具体业务欢迎垂询 021-50801873，或E-MAIL service@fudanyueda.com 我们将竭诚为您服务。

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