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荧光定量PCR

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荧光定量PCR概述

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，实时定量PCR (real-time quantitative PCR)技术便是一种具有革命性意义的定量PCR技术。所谓实时定量PCR是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量。

目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域，仅2000-2001年，收录在Medline上的以real-time PCR为关键词的文章就达1000多篇。实时PCR技术较之以前的以终点法进行定量的PCR技术具有无与伦比的优势。首先，它不仅操作简便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特异性。其次，由于是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定，大大降低了污染的可能性并且无须在扩增后进行操作。

我们的Real-time PCR实验技术服务流程

以SYBR Green荧光染料法提供real-time PCR技术服务

1， RNA抽提：我们提供组织、细胞等来源样本的RNA抽提服务，并逆转录为cDNA。

2，客户需提供已知的全长基因序列及待检基因的背景信息

3，我们设计并合成引物

4，用ABI 7900进行实时定量PCR实验

5，原始数据：目的基因与内参基因的比值以校正误差，检测结果为目的基因的相对定量。

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