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确诊布氏杆菌病的免疫学方法

放大字体  缩小字体 发布日期:2011-09-06  浏览次数:851

1.试管凝集试验

采集临床血清,预先稀释,取每份预先稀释好的4个不同稀释度的受检血清分别加入4个凝集试验管内,每管o.5ml,加0.5ml 20倍稀释的抗原于受检血清各试管内,并振摇均匀:置3;一40℃温箱24h,取出检查并记录结果。牛、马、鹿和骆驼1:100血清稀释度,锗、山羊、绵羊和狗1:50血清稀释度出现“++”以上凝集现象时,受检血清判定为阳性;牛、马、鹿、骆驼1;50血清稀释度,猪、山羊、绵羊、狗1:25血清稀释度出现“++”以上凝集现象时.受检血清判定为可疑反应。经3-4周后重检,如果仍为可疑,该牛、羊判为阳性:猪和马经重检仍保持可疑水平,而牲畜没有临床症状和大批阳性患畜出现,该畜被判为阴性;猪血清偶有非特异性反应,须结合流行病学调查判定,必要时应配合补体结合试验和鉴别诊断。排除耶尔森菌交叉凝集反应。

2.补体结合试验(CFT)

补体结合试验操作复杂,需有良好的实验设施和训练有素的人员作准确地滴定和保存试剂,尽管如此,该试验仍在广泛使用,而且还是公认的确诊方法。指示系统是2.5%一3%的已用等体积兔抗绵羊红细胞的血清(溶血素)致敏过的新鲜或以前保存的绵羊红细胞悬液(SRBCs)。试验前血清要灭活,可使用96孔U形板进行具体操作。
第1排一第3排每孔加25rtl稀释的被检灭活血清,第2排为每份血清的抗补体对照。第一排各孔不加抗原,加入CFT缓冲液(抗补体对照)。除第2排外其他各排每孔加25ul CFT缓冲液。从第3排取稀释血清25rtl向后连续作系列倍比稀释。
除第1排外每孔加入25uL稀释至工作浓度的抗原和稀释至含所需单位的补体。
对照孔设置 只有稀释液,阳性血清+补体+稀释液,抗原+补体十稀释液和补体十稀释液。每一种对照总体积都设定为75uL。每一次试验中都设有能发生最小阳性反应的血清对照,用以检测试验条件的敏感性。
微量板于37℃孵育30rain或4℃过夜,每孔加25ltl或50rtl致敏sRBC悬液,微量板于37℃再孵育30rain。
微量板在4℃条件下1000g离心10min或4℃放置2~3h,使未溶解的红细胞下沉,溶血程度与相当于0、25%、50%、75%和100%溶血标准进行对比,判读结果。第1排检测每份血清的抗补体活性缺失情况。
结果解释 当滴定结果等于或大于20个国际补体结合单位(1CFUT)时结合补体呈阳性,血清判为阳性。在3-6月龄时曾用牛种布氏杆菌19株免疫过的母畜,如果在其18月龄或更大时进行检测,其血清滴定等于或大于301CFTU/m1则判定其为阳性。


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