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高密度羧基磁珠PuriMag G-COOH

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品牌: PuriMag
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所在地: 福建省 厦门
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-05-26 18:58
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
 一、概述

PuriMag G-COOH磁珠提供永久结合和固定各种含胺配体的灵活性。 珠子表面上的高密度羧酸基团(COOH)可用于配体如蛋白质,肽和核酸的共价偶联。 用EDC活化珠表面上的羧基,使配体通过伯胺基与珠偶联,形成稳定的酰胺键。 PuriMag G-COOH是均匀的聚苯乙烯基超顺磁珠,适用于各种磁性分离应用,包括亲和力富集,蛋白质纯化,免疫沉淀和细胞消耗。

二、产品特性

1.  PuriMag GS-COOH短链羧基磁珠

基团密度> 600 umoles carboxylic acid/g beads

 

2.  PuriMag GL-COOH长链羧基磁珠

基团密度> 300 μmoles carboxylic acid/g beads

形态:超顺磁球形

直径:200nm

储存:10 mg/mL ,去离子水中 2~8 °C保存,勿冻结。

常温运输,正确使用保存期一年。
更多生物磁珠请访问 http://www.purimagbead.com/Product/7196422517.html

三、缓冲液

Coupling Buffer(偶联缓冲液):

50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;

Coupling Agent(偶联试剂):

EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide];

Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)

Quench Buffer(淬灭缓冲液):

TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;

Storage Buffer(储存缓冲液):

TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.

四、PuriMag G-COOH的使用

以下方案为配体与100μL的PuriMag G-COOH羧基磁珠的偶联方案。该方案可按需放大或缩小。强烈建议对珠子活化(EDC、EDC / NHS和pH)和偶联条件(配体浓度、偶联缓冲液、pH、反应体积和温育时间)进行优化。

注意:

■ 通过涡旋确保磁珠均匀悬浮。

■ 为获得最佳性能,在无胺偶联缓冲液中偶联,蛋白应为0.5〜4mg / mL,寡核苷酸为20〜100μM,不含其它蛋白。较高浓度的蛋白可灵活地优化反应体积。含tris、甘氨酸、醋酸盐或柠檬酸盐的缓冲液不能使用。

■ 含有0.01%的Triton X-100的50 mM MES缓冲液(pH 6.0)可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时,寡核苷酸末端应有5'-胺基以偶联磁珠。

■ 珠子含有0.5%SDS以稳定悬浮液。尽管非必须,但在所有缓冲液中包含0.01〜0.05%Triton X-100或0.01〜0.05%吐温20将防止珠粒凝结并改善分散特性。

偶联方案A:使用EDC的两步偶联

该方案被推荐用于将蛋白偶联到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亚胺(EDC)活化珠上的羧基以形成胺反应性中间体。除去EDC后,加入蛋白质配体并通过蛋白质上的伯胺与磁珠的活化羧基偶联。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中,磁分离并吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液,涡旋20秒洗涤磁珠,磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再次清洗羧基磁珠两次。

5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC(50 mg / mL)。

6. 向磁珠中加入80μL偶联缓冲液和20μL新配的EDC溶液,混匀。室温孵育15分钟,磁分离并吸弃上清。

7. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠,涡旋混匀,磁分离并吸弃上清。

注意:该步骤应该快速进行,因为磁珠上的胺反应性中间体不稳定。

8. 向羧基磁珠加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白质或配体,涡旋混匀。

9. 室温下孵育30分钟。根据配体和浓度的不同,最佳孵育时间可能为0.5〜4小时。

10. 将试管放入磁力架中,磁分离并吸弃上清。该上清液含有未结合的配体,如果优化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒,磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。

13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。

偶联方案B:用sulfo-NHS替代两步偶联

该方案与上述方案类似,但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分离并吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。

5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC(50 mg / mL)。在使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS(50mg / mL)。

6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。

7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。

8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀,磁分离并吸弃上清。

9. 加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白或配体。涡旋混匀。在室温下连续混合孵育0.5〜4小时。

10. 将试管放入磁力架中,磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体,如果优化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒,磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。

13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。

偶联方案C:一步偶联

这是一个快速结合方案,在一个反应中同时加入羧基磁珠、EDC和配体。该方案最适合偶联寡核苷酸和小分子,当配体上的羧酸基团的激活不会影响后续实验时。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白或1〜5nmol寡核苷酸进行偶联。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分离并吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。

5. 从磁力架上取下EP管。在80μL偶联缓冲液中加入50〜400μg配体。

6. 在室温下孵育30分钟。

7. 使用前用偶联缓冲液配制EDC(50 mg / mL)。

8. 将20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。涡旋混匀,室温下连续混合孵育0.5〜4小时。

9. 将试管放入磁力架中,磁分离并吸弃上清。该上清含未结合的配体,如果优化方案可以保存用于分析。

10. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒,磁分离并吸弃上清。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

13. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。

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