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骆驼免疫VHH抗体库构建服务

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最后更新: 2019-05-10 16:30
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
 骆驼免疫VHH抗体库构建服务
   
 
人源免疫球蛋白IgG含有两条重链和轻链,而骆驼类抗体只有含有重链,因此又被称为重链抗体(heavy Chain Antibody, hcAb)。骆驼抗体的抗原结合区含有3个互补决定区(CDR),与普通抗体相比,即使缺少相应的轻链部分,骆驼抗体也具有很好的抗原识别以及结合能力。由于缺少轻链,骆驼抗体的抗原结合区域,又称为VHH结构域的分子量大小只有12-15 kDa, 远远小于普通抗体的抗原结构域,能够透过血脑屏障。同时,骆驼抗体具有极其稳定的性质,比如在60℃能保持活性,抵抗极端的pH环境。

抗体文库制备服务 – 骆驼VHH抗体库构建服务

构建高质量的骆驼VHH抗体噬菌体展示文库是获得高质量单克隆VHH抗体的有效方式之一,而构建高质量VHH文库则需要骆驼免疫、外周血处理,抗体基因克隆,噬粒构建等一系列行之有效的策略和方案。卡梅德生物坚守QbD(Quality based Design)原则,为务产品。

---VHH抗体库设计理念

噬菌体展示VHH抗体文库的核心在于提升独立噬菌体展示克隆的数量,在卡梅德生物的实验室中,科学家努力将抗体V区基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目庞大的独立克隆。此外我们提供更加先进的理念,我们设计了一套方案:在体外对人外周血单核细胞进行敏化处理后,通过流式分选技术分离出高亲和力的单核细胞,再进行文库建设。

---噬菌体宿主体系选择

我们拥有M13,T4和T7噬菌体展示系统,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。

项目流程:

 

步骤

服务内容

周期

 

外周血单核细胞单克隆化

1. 准备2-5只健康、足龄双峰驼

2. 免疫骆驼3-5

3. ELISA检测血清效价,效价满足要求后取外周血

6-8

 

抗体cDNA制备

(客户可以提供细胞)

1. RNA提取

2. 高保真RT-PCR制备cDNA

3. 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量

 

 

构建抗体库

1. 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成

2. cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因

3. scFv基因拼接

4. 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库

5. 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列

6. 包装,>11013噬菌体颗粒/ml

8-9

 

交付

*构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息。

*产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库。

 

 

注 :1.客户提供人外周血淋巴细胞,淋巴结细胞或脾脏细胞(保存在RNA later等溶液中,避免RNA降解,蓝冰运输),从第二步开始制备Fab抗体文库,只需8-9周即可完成。

2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物,干冰运输。

 

 

 

项目特征:

*免疫,天然和合成抗体噬菌体文库构建

*周期短:预制抗体文库筛选服务

*高库容量:独立克隆数 107 - 1012

*高亲和力抗体制备:10-7 - 10-13

*多种噬菌体展示系统:M13,T4,T7

*个性化的淘筛策略

*严禁完整的QC标准

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