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单克隆抗体的制备

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所在地: 湖南 长沙
有效期至: 长期有效
最后更新: 2007-09-12 14:29
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
公司的专家具有十多年的单克隆抗体生产和鉴定的经验,能为您提供多方位的,灵活的、适合您的抗体定制服务。 根据客户特殊的抗原制备杂交瘤细胞系,包括以下过程: 第一阶段:免疫 客户提供抗原,根据标准的免疫方案进行免疫,监测小鼠的免疫反应。初次抗原免疫,动物分别于间隔 3-4 周进行加强免疫。第三次加强免疫 2 周后,采集血清并进行抗体效价测定。继续加强免疫直至血清效价达到要求。选择效价最高的动物进行最后一次免疫,即融合前加强免疫。 第二阶段:融合及分析 脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制定筛选计划以获得产生抗体的最佳杂交瘤细胞。选择效价最高的动物,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合。融合后 10 ~ 12 天检测杂交瘤细胞培养上清,筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞,并对阳性的克隆进行克隆化,经多次克隆化保证细胞为单克隆,且连续两次克隆化所检测亚克隆的阳性率为 100% 。扩大培养抗体阳性的亚克隆,并送客户评价。选择最终的克隆扩大培养并冻存,测定 Ig 的亚型。可以为客户提供冻存的细胞或培养的细胞。 按阶段分步的标准单克隆抗体服务流程: 阶段一 通过规范化免疫接种程序免疫 5 只 BALB/c 小鼠。用 ELISA 测定血清滴度。 您需 提供符合技术要求数量足够的抗原 ,3-4mg 蛋白免疫原 ( 要求纯度 SDS-PAGE 大于 90%), 或两种不同交联 ( 如交联 BSA 或 KLH 等 ) 的多肽各 2-3mg( 要求纯度大于 90%), 分别作为免疫原和筛选抗体用。 公司提供载体与多肽的交联服务。 阶段二 当血清中抗体滴度达到融合要求后,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,用 ELISA 方法检测杂交瘤细胞培养的上清液。筛选出抗体阳性的杂交瘤细胞克隆,阳性克隆培养上清液将会送交给客户实验室作进一步鉴定。 阶段三 根据客户需要,阳性克隆通过有限稀释进行多次克隆化,并测定抗体 Ig 的亚型。选择 3-5 个克隆生产腹水。 结果交付: 为客户提供 3 ~ 5 个克隆杂交瘤细胞株,每个克隆提供 10ml 的腹水。 需时: 6 ~ 8 个月 项目 价格 单克隆抗体的制备(全程服务) 45000 元 注 : 抗体的制备 各阶段的 ELISA 检测为免费 相关服务 Western Blotting ( WB )实验 100 元 腹水生产 1000 元每 20 毫升腹水 抗体纯化 1700 元每 10 毫升腹水 ( 硫酸铵沉淀法 ) 2500 元每 10 毫升腹水 (ProteinA 或 ProteinG 亲合层析法 ) 兔多克隆抗体的制备 这项服务包括免疫 2 只雌性新西兰白兔用于生产抗血清,并进一步提供抗血清纯化服务,包括免费的 ELISA 测定抗血清效价。 1. 免疫原由客户提供,如为蛋白抗原,要求其纯度 SDS-PAGE 大于 85% ;如使用多肽抗原,整个过程共需 5 ~ 6mg 交联的多肽抗原, 3.5mg 抗原用于免疫 2 只新西兰白兔,另 1 ~ 2mg 抗原用于 ELISA 效价测定。 2. 兔的全程免疫。 2 只新西兰白兔,采用以下标准的免疫程序: 操作 天数 备注 免疫 0 首次免疫 50 ~ 250mg/ 只,与弗氏完全佐剂混合 21 再次免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合,皮下多点 42 加强免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合,皮下多点 70 加强免疫相同剂量与弗氏不完全佐剂混合,皮下多点 采血 0 采集对照血清, 5ml 77 采集血清 2ml 测效价 78 第一次采血, 15 ~ 20ml 血清 85 第二次采血, 40ml 血清 4. 血清抗体 ELISA 效价检测,不另收费。 5. 血清的纯化, ProteinG 方法 (90%) 。 交付时间: 免疫程序结束后 1 周。 结果交付: 为客户提供 ELISA 效价大于 1:5000 ,总量 80 ~ 100ml 免疫血清,实验记录及相应的鉴定报告。
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