QQ:859207209
标王 热搜: TNF  ELISA试剂盒  PTHRP  试剂  AGE  ELISA  试剂盒  elis  人C  %%%% 
 
当前位置: 首页 » 试剂盒 » 检测试剂盒 »
点击图片查看原图

植物多巴双加氧酶活性比色法定量检测试剂盒

  • 发布日期:2018-01-11 15:24
  • 有效期至:长期有效
  • 试剂盒区域:全国
  • 浏览次数90
  • 留言咨询
 
详细说明
  

YIJI植物多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

YIJI植物多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物L-多巴在多巴4,5-双加氧酶的作用下,产生甜菜醛氨酸后峰值的升高,即采用比色法来测定植物组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织裂解悬液样品或者粗提酶蛋白的多巴双加氧酶的活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

 

技术背景

 

多巴4,5-双加氧酶(dopa-4,5-dioxygenase;DDO;EC1.13.11.29)是一种外二醇环裂解酶(extradiol ring-cleaving enzyme),为同源二聚体,存在于植物组织细胞的胞浆中。通过打开多巴分子上碳4和5之间的环链接,产生不稳定中间产物开环多巴(4,5-seco-DOPA),继而自发再环状化化学反应,生成甜菜素(betalain)的基本生色分子甜菜醛氨酸(betalanic acid),一种荧光性醛类分子。多巴4,5-双加氧酶参与植物花、果等组织中水溶性含氮色素甜菜素的生物合成,包括甜菜红素(betacyanin)和甜菜黄素(betaxanthin),由此进行光合成及其保护机制、吸引授粉昆虫和种子播撒生物、预防生物性和非生物性的压力。多巴4,5-双加氧酶在石竹目(Caryophyllales)植物顶部组织表达水平十倍于柄部组织。基于底物L-多巴在多巴4,5-双加氧酶的作用下,产生开环多巴后,自发形成甜菜醛氨酸,产生的吸光峰值的变化(430nm 波长),来定量分析多巴4,5-双加氧酶的活性。其反应系统为:

 

       

产品内容

 

YIJI裂解液(Reagent A)   毫升

YIJI活性液(Reagent B)   微升

YIJI缓冲液(Reagent C)   毫升

YIJI反应液(Reagent D)   微升

YIJI底物液(Reagent E)     微升

YIJI阴性液(Reagent F)     微升

产品说明书      1份

 

保存方式

 

保存YIJI裂解液(Reagent A)、YIJI活性液(Reagent B)、YIJI反应液(Reagent D)和YIJI底物液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月

 

用户自备

 

2毫升离心管:用于样品操作的容器

DOUNCE匀浆器:用于裂解组织

(微型)台式离心机:用于样品操作

比色皿或96孔板:用于比色分析的容器

分光比色仪或酶标仪:用于比色分析

 

实验步骤

 

实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的YIJI裂解液(Reagent A置入冰槽里融化。然后进行下列操作。

 

一、 样品准备

 

1. 准备好新鲜的植物组织,并秤重以确定组织重量200毫克 

2. 移入到一个液氮冻存管

3. 即刻放进液氮罐过夜

4. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融

5. 放进一个2毫升离心管

6. 加入预冷的XX微升YIJI裂解液(Reagent A

7. 加入XX微升YIJI活性液(Reagent B)

8. 涡旋震荡5秒,充分混匀

9. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

10. 在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约80下) 

11. 将所有组织匀浆物移入2毫升离心管

12. 放进4℃微型台式离心机离心5分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)

13. 小心移取500微升上清液到新的预冷的2毫升离心管

14. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-YJ30030.1

15. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

 

二、 测定准备

 

1. 开启并设定好分光比色仪(温度为30℃):波长430nm,间隔5分钟,读数5次(共20分钟),并置零 

2. 从-20℃冰箱里取出试剂置于冰槽里融化;YIJI缓冲液(Reagent C室温下均衡温度

 

三、 背景对照测定

 

1. 移取XX微升YIJI缓冲液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入XX微升YIJI反应液(Reagent D

3. 加入XX微升YIJI底物液(Reagent E

4. 在30℃温度下孵育3分钟

5. 加入XX微升YIJI阴性液(Reagent F

6. 上下倾倒数次,混匀(限定在3秒之内)

7. 即刻放进分光比色仪检测,此为背景空对照(20分钟读数-0分钟读数)

 

四、 样品测定

 

1. 移取XX微升YIJI缓冲液(Reagent C到新的比色皿

2. 加入XX微升YIJI反应液(Reagent D

3. 加入XX微升YIJI底物液(Reagent E

4. 在30℃温度下孵育3分钟

5. 加入25微升(100微克蛋白)待测样品

6. 上下倾倒数次,混匀(限定在3秒之内)

7. 即刻放进分光比色仪检测,此为样品读数(20分钟读数-0分钟读数) 

 

五、计算样品活性

 

 

六、 酶标测定

 

1. 在96孔板上做好相应标记:背景对照和样品

2. 分别移取XX微升YIJI缓冲液(Reagent C到96孔板中的所有孔里

3. 分别加入XX微升YIJI反应液(Reagent D

4. 分别加入XX微升YIJI底物液(Reagent E

5. 在30℃温度下孵育3分钟

6. 分别加入XX微升YIJI阴性液(Reagent F或待测样品(100微克蛋白)到相应孔里

7. 轻轻摇动96孔板

8. 即刻放进酶标仪检测:0分钟读数和20分钟读数

9. 活性计算

 

 

注意事项

 

1. 本产品为20次操作,包括背景对照

2. 操作时,须戴手套

3. 系统操作过程中,背景测定只需1次

4. 建议使用比色皿测定

5. 样品须澄清,至关重要 

6. 加样后3秒内比色测定

7. 测定值由低到高变化;测定可持续20分钟

8. 比色测定后,比色皿须清洗彻底

9. 样本测定20分钟读数高于0分钟读数表明具有酶活性

10. 建议待测样本蛋白浓度为100微克/25微升(组织总蛋白);如果样本酶活性过低或过高, 则可以增加或降低样本量(本公司提供 YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-YJ30030.1)

11. 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度

12. 多巴4,5-双加氧酶活性单位定义为:在30℃,pH 8.0条件下,每分钟内能够产生1微摩尔甜菜醛氨酸所需的酶量作为一个活性单位

13. 本公司提供系列植物酶类分析试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测敏感

 

 

订购信息

 

单组分订购信息

 

编号 名称 规格

YJ50744.1 YIJI植物多巴双加氧酶活性比色法定量检测试剂盒 20次

YJ50744.1A  YIJI裂解液(Reagent A)      100毫升

YJ50744.1B YIJI活性液(Reagent B)      1毫升

YJ50744.1C YIJI缓冲液(Reagent C)     50毫升

YJ50744.1D YIJI反应液(Reagent D)      5毫升

YJ50744.1E YIJI底物液(Reagent E)      5毫升

YJ50744.1F YIJI阴性液(Reagent F) 5毫升

YJ30030.1 YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒  200次

 

 

试剂盒订购信息

 

产品编号

名称

规格

YJ50744.1

植物多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性比色法定量检测试剂盒

20次

YJ50744.2

真菌/酵母多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性定量检测试剂盒

20次

YJ50745.1

植物多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性高效液相色谱法定量检测试剂盒

20次

YJ50745.2

真菌/酵母多巴双加氧酶(dopa dioxygenase)活性高效液相色谱法定量检测试剂盒

20次

 

 

 
[ 试剂盒搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 违规举报 ]  [ 关闭窗口 ]


 
联系方式
 
该企业最新试剂盒
 
网站首页 | 广告图文 | 付款方式 | 关于我们 | 版权隐私 | 联系方式 | 诚聘英才 | 网站地图 | 排名推广 | 广告服务 | 积分换礼 | 网站留言 | RSS订阅 | 京ICP备05052705号
Powered by DESTOON