MagDNATM 磁珠植物DNA提取试剂盒

 MagDNA^TM 磁珠植物DNA提取试剂盒 ( 磁珠型 )

v 适用范围：

适用于手动快速提取各种植物基因组DNA，无需蛋白酶消化 ，也适用于SPRI-TE；雅培m2000；MagNA Pure LC 2.0 System；BioRobot MDx Workstation；King Fisher（ml)；King Fisher 96 process，ABIgen Magstation等系列核酸提取仪，适合大规模提取！

v 试剂盒组成、储存、稳定性：

试剂盒组成	保存	50次	100次	200次
Lysis Buffer  A	室温	30ml	60 ml	120 ml
Solution  AB	室温	12ml	22ml	44 ml
Binding Buffer  PQ	自备	异丙醇	异丙醇	异丙醇
Wash Buffer B	室温	15 ml         25ml            25mlx2 第一次使用前按说明加指定量乙醇（3倍）
Wash Buffer C	室温	12 ml         25ml            25mlx2 第一次使用前按说明加指定量乙醇（4倍）
Elution Buffer E	室温	10ml	15ml	25ml
MagDNA磁珠	室温	1.2ml	1.2ml X 2	1.2ml X 4

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:

1. Lysis Buffer  A或者Wash Buffer B低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

3. 加入MagDNA磁珠前，请漩涡混匀，以免影响浓度的均一性。

 

v 产品介绍：

本试剂盒采用国内领先的专利技术合成的高度分散均一的纳米磁珠颗粒，表面修饰高效核酸结合基团，能最大限度的吸附DNA和RNA，艾比根经过多次实验优化缓冲液体系，开发出一系列高效核酸纯化试剂盒。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于MagDNA® D-Beads DNA磁珠， 再通过一系列快速的漂洗除杂的步骤， 将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐高pH值的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从磁珠上洗脱。适合多种核酸纯化仪器，可以实现核酸的自动化快速分离。为您的科研工作带来方便！

v 产品特点：

1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3. 多次漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

4. 一般加入结合液和磁珠，由于DNA浓度较大会析出，会和磁珠缠绕在一起，形成一团黑色螺旋装物质，请缓慢颠倒，团状即是DNA和磁珠的复合体。

5. 洗脱液Elution Buffer E不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于8.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （30mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.5），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

v 注意事项：

1. 需要自备异丙醇和无水乙醇。

2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

 

v 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：第一次使用前请先在Wash Buffer C中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1. 取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

     也可以直接加入裂解液研磨或是匀浆！

2. 转移细粉到一个1.5ml离心管，不要解冻，加500μl Lysis Buffer  A重 70℃预热的裂解液 (确认已加入β-巯基乙醇至2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。

如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。

3. 上下吹打裂解细胞，或者剧烈涡旋10秒帮助裂解细胞，70℃水浴10min-20min。

4. 可选步骤: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度10μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。

5. 加入冰冷的180μl Solution  AB后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。

6. 12，000 rpm(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。这时候应该可以见到管底暗绿色或是白色的块状沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

7. 小心吸取上清（大约500μl）到一个新的1.5ml离心管中。

吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

8. 加入等体积的室温Binding Buffer PQ（异丙醇500μl）和20μl MagDNA磁珠，立刻上下颠倒20次充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，也可能会形成一团或是类似双螺旋的丝状物质，请不要吸走黑色团块。

上述步骤中充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

9. 将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，不要吸到磁珠。

10. 取下离心管，加入500μl 杂质去除缓冲液Wash Buffer B （请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体。

11. 加入600μl漂洗液Wash Buffer C （请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，弃掉废液。

12. 加入500μl漂洗液Wash Buffer C（请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，弃掉废液。（尽可能的吸掉残余液体，以免影响下游实验）

13. 取下离心管，将其放置在37-65℃的烘箱种晾干残余乙醇。（也可用吹风机吹2-3min即可，不要太干，以免DNA难以溶解）

14. 加入50-100μl洗脱缓冲液Elution Buffer E，轻轻弹动管壁，将磁珠完全打散分散在洗脱缓冲液中，室温放置1-2min。

（洗脱缓冲液在 65-70℃水浴中预热效果更好，如果要得到更高浓度的DNA可以

减少洗脱体积，也可分两次洗脱）

15. 将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的转移溶液到一新的离心管，不要吸到磁珠，如果吸到磁珠可重新放置在磁力架上分离。

DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。